产品编号：PriCells-MSCYD-002
产品价格：￥1680
产品描述
本产品为团队精心优化的间充质干细胞成脂诱导分化试剂盒，可增强间充质干细胞向成脂细胞分化的能力。
本产品仅用于科研用途，不可用于诊断、治疗、临床、家庭及其他用途。
产品组成成分及保存
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试剂名称 |
体积（100mL规格/200mL规格） |
保存条件及有效期 |
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诱导分化添加剂Ⅰ |
5mL / 10mL |
-20℃，1 Year |
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诱导分化添加剂Ⅱ |
0.1mL / 0.2mL |
-20℃，1 Year |
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优质胎牛血清 |
10mL / 20mL |
-20℃，1 Year |
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细胞基础培养基 |
85mL / 170mL |
4℃，1 Year |
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油红O染色液 |
5mL / 10mL |
4℃避光，1 Year |
注意：
1.为保证产品的有效性，请避免反复冻融。
2.配制好的诱导培养基保存于2-8℃，有效期为2周，请根据实验用量合理配制。
产品使用说明
1. 成脂诱导分化完全培养基的配制
①室温条件下融化各因子及血清。各因子融化后，瞬时离心，使溶液集中于离心管底部。（注意：若因子或血清中有沉淀物，属正常现象，无须过滤，避免成分丢失。）
②根据实验用量，于无菌操作台中配制诱导分化完全培养基，建议每次配制50mL，配制比例见下表：
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试剂成分 |
配制比例 |
50mL配制体系 |
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诱导分化添加剂Ⅰ |
5% |
2.5mL |
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诱导分化添加剂Ⅱ |
0.1% |
50uL |
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优质胎牛血清 |
10% |
5mL |
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85% |
42.5mL |
2. 成脂诱导分化实验步骤
①建议取第3~5代、纯度达90%以上、状态良好的间充质干细胞，将其消化下来，离心收集，使用含10%FBS的完全培养基调整细胞密度，均匀铺于培养瓶/板中，置于37℃5%CO2，饱和湿度的培养箱中培养。（细胞接种详情参考表二）
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培养器皿 |
底面积 |
细胞量 |
培养液体积 |
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24孔培养板 |
2cm/孔 |
2×105cell/孔 |
1mL/孔 |
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12孔培养板 |
4.5cm/孔 |
4.5×105cell/孔 |
2mL/孔 |
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6孔培养板 |
9.6cm/孔 |
9.6×105cell/孔 |
2mL/孔 |
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T25培养瓶 |
25cm |
25×105cell |
5mL |
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6cm培养皿 |
21cm |
21×105cell |
5mL |
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10cm培养皿 |
55cm |
55×105cell |
10mL |
表二
②待细胞汇合度达80%~100%时，即可进行诱导分化。
③小心吸弃细胞培养上清，沿孔壁缓慢加入提前配制好的诱导分化完全培养基，置于37℃恒温细胞培养箱中培养。（注意：完全培养基加入细胞前需提前置于37℃预热。）
④每2~3day换用新鲜的诱导分化完全培养基。换液时，若细胞培养上清颜色变为澄清的黄色，是由于细胞量较大，培养基消耗较快导致的，请及时缩短换液周期。（注意：完全培养基加入前需提前置于37℃预热。）
⑤细胞诱导3周后，即可进行油红O染色鉴定。
3. 油红染色分析
①细胞诱导分化结束后，小心吸弃细胞培养上清，1×PBS润洗1~2次。加入适量细胞固定液，室温固定30 min。（细胞固定液为4%中性甲醛溶液等，体积参考表二）
②配制油红O工作液：油红O贮存液与蒸馏水按照3：2配制，（例：油红O贮存液3mL，蒸馏水2mL），混匀。使用滤纸过滤，收集滤液，即为油红O工作液。（注意：成脂细胞内的油滴极易脱落，操作时须谨慎。）
③细胞固定完成后，吸弃细胞固定液，1×PBS润洗2次。沿孔壁缓慢加入适量油红O工作液，室温染色30min。（注意：油红O工作液底部可能会有沉淀，吸取时尽量不要触及底部。若细胞染色后有沉淀，PBS洗去即可。）
④吸出染色液，PBS润洗，去掉浮色。显微镜下观察细胞染色效果。细胞内油滴着色，呈红色。（注意：油红O工作液不可重复使用，不建议回收。）
质量控制
ü 无菌检测（细菌、真菌和支原体检测）
ü pH测试
ü 渗透压检测
ü 内毒素
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